Can Get Signal 実施例5
ウエスタンブロットによる海馬内のNR2A (NMDA receptor subunit)の発現量の検出

【データご提供】
東京大学医科学研究所神経ネットワーク分野

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【結果・コメント】
175kDaにあるバンドがNR2Aのバンドを示しています。およそ2〜4倍くらい感度が上がりました。
この抗体はもともと特異性の高い抗体だったのですが、希釈倍率が低く、抗体の消費が激しかったので、Can Get Signal®を使えば、抗体の使用量を減らせそうなので、抗体の節約に役立ちそうです。

 

【実験方法】

  1. サンプルの調製
  ●サンプルの由来:マウスの海馬
  ●サンプル:Tissue Homogenate(細胞・組織ライセート)

  2. タンパク質のウェスタンブロッティング
  ●ブロッティング方法:セミドライ法

  ●メンブレンのブロッキング
  1. ブロッキング溶液:0.5% Skim Milk in TBST
  2. インキュベート温度:室温
  3. インキュベート時間:1時間

  3. 抗体の反応
  <1次抗体>
  1. メーカー名 :Frontier Science
  2. 商品名 :Anti NR2A
  3. 希釈倍率:1/500
  4. 希釈溶液:0.5% Skim Milk in TBST or Can Get Signal® Solution1
  5. インキュベート温度:4℃
  6. インキュベート時間:O/N

  <2次抗体>
  1. メーカー名:GEヘルスケアバイオサイエンス株式会社
  2. 商品名:anti-rabbit IgG HRP
  3. 希釈倍率:1/4,000
  4. 希釈溶液:0.5% Skim Milk in TBST or Can Get Signal® Solution2
  5. インキュベート温度:室温
  6. インキュベート時間:1時間
 
  4. シグナルの検出
  ECLplus(GEヘルスケアバイオサイエンス株式会社)