実施例
KOD One 実施例3 逆転写反応液の持ち込み可能量の確認
逆転写反応液(cDNA)に含まれるRNAはPCRに対して阻害的に働くため 、大量のcDNAの添加は反応阻害につながります。そこで、cDNAの持ち込み可能量を確認するため、cDNAの添加量をふり、TFR遺伝子の検出を行いました。
その結果、KOD One® PCR Master MixはRNAによる阻害を受けにくく、従来品や他社品では増幅困難な多量のcDNAを添加した条件においても良好な増幅を行うことができました。
【プライマー配列】
Forward Primer : CCACCATCTCGGTCATCAGGATTGCCT
Reverse Primer : TACTCCTTAACGAGAAGACATCTCAAGAC
【反応液組成】 【PCRサイクル】
| (μL) | ||||||
| 滅菌蒸留水 | 17 | 98℃ 10sec. |  |
30cycles | ||
| KOD One® PCR Master Mix/-Blue- | 25 | 60℃ 5sec. | ||||
| 10pmol/μL Primer F | 1.5 | 68℃ 18sec.(5sec./kb) | ||||
| 10pmol/μL Primer R | 1.5 | |||||
| cDNA | 5 |
KOD One® PCR Master Mix以外のPCR酵素は、 |
||||
 |
||||||
| Total Volume | 50 | |||||
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