DNA断片やニックを連結する活性を有する酵素です。

T7ファージ由来耐熱性RNA合成酵素 Thermo T7 RNA Polymerase (TT7)

価格表

Thermo T7 RNA Polymerase <>

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
TRL-201 7,500U×1本 ¥12,000 -20℃ データシート SDS 該当無し
TRL-201X5 (7,500U×1本)×5 ¥48,000 -20℃ データシート SDS 該当無し
TRL-252 50,000U×1本(高濃度) ¥70,000 -20℃ データシート SDS 該当無し

用途

●高標識RNAプローブの作製
●RNAスプライシング反応の前駆体の作製
●Cap analogをプライマーとした、Cap構造を持つmRNAの作製
in vitro Translation用のmRNAの作製

説明

Thermo T7 RNA Polymeraseは、遺伝子工学的手法によりT7 phage由来のRNA Polymeraseに点変異を導入し、耐熱性を付与しています。
野生型T7 RNA Polymeraseに対して、熱安定性が高く50℃でも反応可能であり、また、37℃においても比活性が向上しています。
 

実施例

1.熱安定性の比較

1.熱安定性の比較

野生型T7 RNA Polymeraseを48℃で、Thermo T7 RNA Polymeraseを50℃で各時間インキュベートを行い、残存活性を比較しました。
その結果、野生型T7 RNA Polymeraseは48℃で5min.インキュベートすることにより活性は約1/10に低下しますが、Thermo T7 RNA Polymeraseは50℃、15min.のインキュベートでもほとんど活性の低下はみられませんでした。

50℃での半減期
野生型T7 RNA Polymerase <1.9min.
Thermo T7 RNA Polymerase 84.5min

 

2.高温における in vitro Transcription反応

2.高温における in vitro Transcription反応

野生型 T7 RNA Polymerase と Thermo T7 RNA Polymerase を用い、各温度での in vitro Transcription 活性の比較を行いました。
T7プロモーターを含むプラスミド0.5μgを鋳型に、RNase Inhibitor を20Uと両酵素を各々25U加え、37~51℃の各温度で60min.反応させた後、反応産物の電気泳動を行いました。

その結果、Thermo T7 RNA Polymerase は51℃においても、転写反応を行えることが分かりました。

参考文献

1)K. Ishikawa et al., Nucl. Acids Res., 33: e112(2005)
2)M. Itoh et al., Nucl. Acids Res.,30: 5452-5464(2002)
3)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2235(1973)
4)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2245(1973)

製品内容

Thermo T7 RNA Polymerase (50U/μl*) 150μl
10×Buffer〔TRL-2B〕1ml×2本
*TRL-252は1,000U/μlの高濃度品です。
 

形状:
20mM KPO4(pH7.5)
100mM NaCl
0.1mM EDTA
5mM DTT
0.01% Triton X-100
50% Glycerol


10×Buffer 〔Code No. TRL-2B〕組成:
  400mM Tris-HCl (pH8.0)
  500mM NaCl
  80mM MgCl2
  50mM DTT


活性の定義:
T7 DNAを鋳型として、37℃、1時間に1nmoleの[3H]-rNTPを酸不溶性沈殿
物に取り込む酵素量を1Uとします。

起源:    
E.coli 組換体

純度:
本酵素25Uと1.5μgのpT7-2 DNAとを、37℃で2時間反応させてもDNAの電気泳動パターンは変化しません。
本酵素100Uと2.4μgの[3H]-RNAとを、37℃で2時間反応させても酸可溶性分解物の生成は、0.02μg以下です。
本酵素100Uと1.7μgの[3H]-T7 DNAとを、37℃で4時間反応させても酸可溶性分解物の生成は、0.02μg以下です。
 


 

基本反応条件

滅菌蒸留水Xμl
10×Buffer 5μl
10mM rNTPs 2μl
RNase inhibitor 20U
鋳型DNA 100~1000ng
Thermo T7 RNA Polymerase 25~100U
Total Volume 50μl

37~50℃、30~60min
 

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※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。