培養細胞からRNA精製が不要で、高品質なcDNA合成が可能

リアルタイムPCR用細胞溶解&cDNA合成キット(培養細胞用) SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR

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価格表

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR

Code No. 包装 価格 キャンペーン価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
SCQ-401 100回用
(96ウェルプレート1枚分)
¥76,000 ¥45,600 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
SCQ-401X5 500回用
(96ウェルプレート5枚分)
¥325,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し

SuperPrep® II Cell Lysis for qPCR

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
SCQ-501 100回用
(96ウェルプレート1枚分)
¥39,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し

SuperPrep® II/THUNDERBIRD® Probe qPCR Set

Code No. 包装 価格 キャンペーン価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
SCQ401/QPS101 SCQ-401とQPS-101のセット ¥99,500 ¥59,700 -20℃ 該当無し

SuperPrep® II /KOD SYBR® qPCR Set

Code No. 包装 価格 キャンペーン価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
SCQ401/QKD201 SCQ-401とQKD-201のセット ¥99,500 ¥59,700 -20℃ 該当無し

用途

●リアルタイムPCR用のcDNA合成

説明

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR[Code No. SCQ-401 は、リアルタイムPCRによる遺伝子発現解析のための細胞溶解試薬(Lysis Reagents)と逆転写反応試薬(RT Reagents) からなるキットです。96ウェルプレート等で培養した細胞から、逆転写反応の鋳型として利用可能なRNA を含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。さらに、本キットに含まれる逆転写反応試薬は、この細胞ライセートからの逆転写反応に最適化されています。
前バージョンでは Lysis Solution の後に Stop Solution を添加する必要がありましたが SuperPrep® II では Lysis Solution での処理の後に、そのまま cDNA 合成ステップに移行することができます。また、より幅広い哺乳類細胞から高感度検出が可能になりました。本キットにより、簡便、迅速に培養細胞からリアルタイム PCR 用の鋳型 cDNA の合成が可能です。
SuperPrep®ⅡCell Lysis Kit for qPCR [Code No. SCQ-501] は、細胞溶解試薬 (Lysis Reagents) の別売品です。弊社のRNA-direct™ Realtime PCR Master Mix (Code No. QRT-101, QRT-201) , THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit (Code No. QRZ-101)等の1-step リアルタイムPCR 試薬を用いる解析(簡易測定)にもご使用になれます。


特長

●RNA精製不要
培養細胞から逆転写反応の鋳型として利用可能なRNA を含む細胞ライセートを簡便に調製することができます。Lysis Solution で処理したライセートを鋳型として、そのまま逆転写反応を行うことができるため、解析時間を大幅に短縮することが可能です。


●ライセートから高品質なcDNAを合成
最適化されたバッファー組成により、RNase等の細胞成分によるRNAの分解を効果的に抑えます(調製したライセート中のRNAは氷上で6時間安定です)。また、gDNA Remover (DNaseⅠ)処理後にcDNA合成を行うことから、ゲノムDNAのコンタミの少ない高品質なcDNAを合成することができます。
逆転写試薬は弊社の高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」をもとに最適化されたマスターミックス※となっており、簡便・高効率にcDNA合成を行うことができます。合成したcDNAは長期保存可能です。
※マスターミックスにはランダムプライマーとOligo dTプライマーが最適比率で混合されています。


●幅広い哺乳類細胞を用いることが可能
SuperPrep® II では、細胞の溶解性を向上させると共にRNase の影響を低減することで、前バージョンに比べてより幅広い種類の細胞を用いるアッセイに使用可能です。下表の代表的な細胞について適用できることを確認しています。



●ハイスループット解析のバラツキ低減
プロトコールから少量の分注工程や希釈工程を減らすことで、ハイスループット解析におけるバラツキを低減しました。また、細胞溶解時のピペッティング操作を無くし、gDNA Remover 処理を並行して行うことで操作性を向上させました。反応停止液の添加や、RNAを不安定化する加熱工程などは不要です。


●さまざまなqPCR試薬と組み合わせて使用可能
さまざまなリアルタイムPCR試薬(SYBR® GreenⅠ、TaqMan®アッセイ両方に対応可能)と組み合わせて使用可能です。
また、弊社THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix(Code No. QPS-101 、KOD SYBR® qPCR Mix (Code No. QKD-201) 等と組み合わせて用いることによって、培養細胞から簡便かつ高精度の遺伝子発現解析が可能であることを確認しています。また、THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit (Code No. QRZ-101)、 RNA-directTM SYBR® Green Realtime PCR Master Mix(Code No. QRT-201)等の1-stepリアルタイムPCR試薬と組み合わせる簡易アッセイも可能です。

実施例

1.精製RNA と細胞ライセートでのCt の相関の検証

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401) を用いて、HUVEC (ヒト臍帯静脈内皮細胞) 2.5x104 cells から細胞ライセートを調製した後、cDNA 合成(40μl 反応系) を行いました。また同時に、HUVEC から抽出したTotal RNA66.6ng からReverTra Ace® qPCR RT Master Mix (Code No. FSQ-201) を用いてcDNA合成(40μl 反応系) を行いました。それぞれのcDNA を鋳型にTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix (Code No. QPS-201) を用いて15 種類のHouse Keeping Gene についてリアルタイムPCR 解析を行い比較しました。
その結果、今回解析した15 種類の遺伝子において、精製RNA と細胞ライセートを用いた解析に良好な相関が認められました。
 

2.細胞ライセートの氷上安定性の確認

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401)を用いて、HeLa S3 細胞4x104 cells から細胞ライセートを調製し、氷上に移した後、0 ~ 6 時間後に細胞ライセートをサンプリングし、すぐにcDNA 合成を行いました。同様に弊社従来品(SuperPrep®) 及びA社試薬を用いて細胞ライセートを調製し、同様にサンプリングして、cDNA 合成を行いました。このcDNA を鋳型にTHUNDERBIRD® Probe qPCR Mix (Code No. QPS-101) を用いて、GAPDH 遺伝子の発現量をリアルタイムPCR を行って解析しました。
その結果、HeLa S3 細胞において氷上に6 時間放置しても顕著なCt 値の遅れは認められませんでした。

製品内容

【SCQ-401】
(Lysis Reagents)
Lysis Solution                 6.5ml×1本
gDNA Remover                 33μl×1本 
RNase Inhibitor               110μl×1本

(RT Reagents)
5×RT Master Mix             860μl×1本
5×RT Mastre Mix no-RT control 
                                       86μl×1本 
Nuclease free Water      1,700μl×2本

【SCQ-501】
Lysis Solution                  6.5ml×1本
gDNA Remover        33μl×1本 
RNase Inhibitor        110μl×1本

基本反応条件

<Lysateの調製)>
以下の割合(1反応分)でLysis Solutionに
RNase Inhibitor と gDNA Removerを添加
  Lysis Solution     58.7μl
  RNase Inhibotor      1μl
  gDNA Remover    0.3μl
               ↓
細胞が入った各ウェルにLysis Solution 
(RNase Inhibitor 及び gDNA Remover含有)
 60μl添加
               ↓
30sec.振とう後室温で4min.30sec.
インキュベート
               ↓
氷上

<逆転写(RT)反応>
以下の割合(1反応分)でRTマスター
ミックスを氷上で調製。
  5x RT Master Mix     8μl
  Nuclease-free Water 24μl
               ↓
32μlずつ分注
               ↓
ライセートを8μl添加
               ↓
37℃,15min.
50℃, 5min.
98℃, 5min.

 

関連商品

高効率1-step 用リアルタイムPCR 試薬

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
THUNDERBIRD Probe One-step qRT-PCR Kit QRZ-101 100回用 ¥33,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
RNA-direct Realtime PCR Master Mix QRT-101 500μl×5本(100回用) ¥33,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。
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