検便検体から食中毒原因菌を反応開始後、最短1時間で検出可能な高速検出タイプの試薬です。

高速マルチプレックスPCR検出キット 腸内細菌遺伝子検出キット -高速蛍光検出-

価格表

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
FIK-311 480回用 ¥240,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し

用途

●腸内細菌遺伝子の検出

説明

腸内細菌遺伝子検出キット-高速蛍光検出-は、食中毒原因菌として知られるサルモネラ、腸管出血性大腸菌(EHEC)、赤痢菌の遺伝子を、マルチプレックスPCRにて増幅し、EvaGreen® 蛍光色素を用いる融解曲線解析により検出するキットです。弊社姉妹品である腸内細菌遺伝子検出キット-マルチPCR-(Code No. FIK-101)、腸内細菌遺伝子検出キット-蛍光検出-(Code No. FIK-301)と比較して、解析時間が大幅に短縮されました。本製品は、最短1時間で解析が完了するため、迅速な陰性判定が行えます。
 

特長

●より迅速、反応時間を大幅に短縮しました
検便懸濁液を加熱・遠心分離するだけでPCRに使用できます。東洋紡独自技術により、高い感度と特異性を維持しつつ、解析時間の短縮が可能になりました。リアルタイムPCR 装置に反応液をセットしてから、約1時間で結果を確認することができます。
*解析時間は、リアルタイムPCR装置の種類によって若干異なります。


 


●簡便
サンプルの調製は検便懸濁液を加熱・遠心分離するだけです。
弊社独自技術で核酸精製不要のPCRを実現しました。検便検体を水に懸濁し、加熱処理と遠心分離を行ったものをPCRに使用します。面倒なDNA精製は必要ありません。
また、本製品はマルチプレックスPCRにより3菌種を一つの反応で検出できるため、リアルタイムPCR装置に反応液をセットするだけで、チューブを開けることなく、1チューブで検出することが可能です。

●様々なリアルタイムPCR装置に対応
Bio-Rad CFX96 TouchTM Deep Well リアルタイムPCR 装置では、1 時間で解析が可能です。その他の装置につきましても、装置に適合したサイクル条件をご用意しております。装置によってPCR、融解曲線解析時間が異なりますが、50 分~ 1 時間20 分程度で解析が行えます。詳しくは、東洋紡テクニカルラインまでお問い合わせください。
 


●必要な試薬をすべて添付
本製品には、解析に必要なすべての試薬が含まれています。融解曲線解析に使用するインターカレーション蛍光色素EvaGreen®も含まれますので、本製品に含まれるすべての試薬を混合し、糞便熱処理液を添加するのみで解析が可能です。
※東洋紡は、米国Biotium Inc.とのライセンス契約のもとEvaGreen®をキットに使用しています。そのため、お客さまでのライセンス契約は必要ありません。




●キャリーオーバー汚染のリスクを低減
偽陽性の発生原因として、キャリーオーバー汚染があります。本製品は、PCRから蛍光検出までをチューブを開けることなく、1チューブで検出することができるため、キャリーオーバーのリスクが低減しています。さらに、本製品は、混入した増幅産物を分解することが可能なUracil-DNA Glycosylaseを含むため、103~104コピー/反応程度の混入したPCR増幅産物を分解し偽陽性を防止することが可能です。


●解析は、専用の解析ソフトをご用意
融解曲線解析データから陽性または陰性を判定するソフトウェアをご用意しております。製品ご購入の方に無償で提供いたします。詳しくは東洋紡テクニカルラインまでお問い合わせください。
 


●検便検体のスクリーニングに利用可
本製品は、50検体からプールした糞便検体の腸内細菌を検出が可能な感度を有しています。そのため、検便検査のスクリーニングに使用することができます。本製品によるスクリーニングを実施する利点として下記の3点が挙げられます。

1)検査当日に90~95%の陰性検体を判定できます。
スクリーニングは数時間で完了できますので、検査当日に90~95%の陰性を判定することができます。陽性となったプールに含まれる検体は、個別に培養法にて検査し陽性を判定します。

2)塗沫培養の検体数を10分の1以下に低減できます。
本製品で90~95%程度の陰性検体を排除できますので、培養法の検体数を全検体数の約10分の1以下に低減できます。

3)判定が簡便です。
本製品では、ピークの検出により判定を行います。そのため、コロニーの色や形状による判定に比べ判定が簡便です。

実施例

1.検出感度の確認
サルモネラゲノムDNA、腸管出血性大腸菌ゲノムDNA、赤痢菌ゲノムDNAをそれぞれ10コピー/反応になるように陰性糞便の熱処理液に添加したものをサンプルとして、本製品を用いてPCRを行った後、融解曲線解析により検出を行いました。解析にはBio-Rad CFX96 TouchTM Deep Wellリアルタイム解析システムを用いました。その結果、いずれの遺伝子も10コピーにおいて明確なピークが認められました。また、陰性糞便の場合は、内部標準(インターナルコントロール)のピークのみが検出され、陰性と判定されました。

製品内容

PCR Master Mix 1.59ml×6本
10×Primer Mix 1.2ml×1本
UNG(Uracil-DNA Glycosylase) 60μl×1本
※PCR480反応分、50検体プール時検便検体24,000検体を処理可能。

基本反応条件

反応条件
PCR Master Mix 15.9 μl
10× Primer Mix 2.0 μl
UNG 0.1 μl
前処理済糞便検体2.0 μl
Total 20.0 μl

サイクル条件
94℃, 20sec.

94℃, 2sec.

50℃, 5sec.        
68℃, 5sec.  [40 cycle]

融解曲線解析 60℃~90℃

備考

EvaGreen® は、Biotium, Inc.の登録商標です。

※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。