高効率RT-PCRキット
ReverTra Dash®
TOYOBO
価格表
用途
●RT-PCR
説明
高効率逆転写酵素ReverTra Ace® と高効率PCR酵素KOD Dash® を使用した、高効率なRT-PCRキットです。この2つの酵素が最適な条件で反応できるよう至適化されているため、逆転写反応とPCRを同一のチューブで行うことができ、逆転写反応産物を分注し直す手間を省くことができます。
ReverTra Ace®は、高温反応性と反応効率を向上させた改変型M-MLV RTase(RNaseH-)であり、従来のRTaseに比べ長いcDNAの合成が可能です(14kbまでのcDNA合成を確認しています)。また、PCR反応はKOD Dash®で行うため、高効率、かつ迅速にRT-PCRを行うことができます。
特長
●高感度
従来のRT-PCRキットに比べて増幅効率が向上しており、少量の鋳型からでも効率良く増幅することができます。また、RT反応を全量PCRに持ち込めるので、少量の発現でも効率良く検出できます。
●簡便
逆転写反応とPCRを2ステップながら同一サンプルチューブ中で行うことができ、操作が簡便です。
●迅速解析
KOD Dashは、PCRの伸長時間を1kb/30sec.で設定できるため、RT-PCRにかかる時間を短縮することができます。
実施例
RT-PCRの効率の検討
HeLa Total RNAを鋳型として、β-actin(838bp)をターゲットとするRT-PCRにおいて、鋳型量を変化させた場合の増幅効率を、当社従来品および他社のRT-PCRキットと比較した。
MagExtracterTM -RNA-を用いて抽出したHeLa Total RNA 100pg〜1.0μgをOligo(dT)プライマーで42℃、20min.逆転写反応を行った後、99℃で5min.加熱して不活性を行った。RT反応液全量20μlを、100μLの系に持ち込みPCRを行った。
ReverTra Dash®では、弊社従来品および他社RT-PCRキットに比べて少量の鋳型RNAからのRT-PCRが可能であることが確認された。
参考文献
1) S. Natsuka et al., J. Biochem.(Tokyo), 130: 731-735(2001)
- 製品内容
KOD Dash(2.5U/μL) 100μL
ReverTra Ace® 100μL
5×RT Buffer[TRT-1B] 400μL
10×PCR Buffer*[LDP-1B] 1mL
Random Primer [FSK-301] 100μL
Oligo(dT)20 Primer [FSK-201] 100μL
10mM dNTPs[NTP-301] 200μL
RNase Inhibitor 100μL
RNase Free H2O 1.2mL
G3PDH Control Primer Set**
50μL each(10pmol/μL each)
Positive Control Human G3PDH RNA
50μL
*10×PCR BufferはKOD Dash用Bufferと同一組成です。
**Human・Mouse・Rat・Swineに対応。G3PDHはシュードジーンが多いため、サンプルに用いる場合には、サンプルをDNaseⅠ処理することをお勧めします。
- 注意事項
PCRには製品に添付されているdNTPsまたは別売りのdNTPs Mixture (10mM) [NTP-301]をご使用ください。他のdNTPsでは、十分な性能が得られない場合があります。
- ※ 法規制について
- 毒： 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国： 国民保護法[毒素]
- 劇： 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組： カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危： 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律）
- Ｐ： PRTR法（化学物質排出把握管理促進法）[届け出義務物質]
- 申： ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労： 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし： 上記法令や申込書の提出に該当しない製品
