増幅効率に優れたRT-PCRキットです。迅速な検出に適しています。

高効率RT-PCRキット ReverTra Dash®

価格表

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
PCR-401 100回用 ¥68,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

用途

●RT-PCR
 

説明

高効率逆転写酵素ReverTra Ace® と高効率PCR酵素KOD Dash® を使用した、高効率なRT-PCRキットです。この2つの酵素が最適な条件で反応できるよう至適化されているため、逆転写反応とPCRを同一のチューブで行うことができ、逆転写反応産物を分注し直す手間を省くことができます。
ReverTra Ace®は、高温反応性と反応効率を向上させた改変型M-MLV RTase(RNaseH-)であり、従来のRTaseに比べ長いcDNAの合成が可能です(14kbまでのcDNA合成を確認しています)。また、PCR反応はKOD Dash®で行うため、高効率、かつ迅速にRT-PCRを行うことができます。

特長

●高感度
従来のRT-PCRキットに比べて増幅効率が向上しており、少量の鋳型からでも効率良く増幅することができます。また、RT反応を全量PCRに持ち込めるので、少量の発現でも効率良く検出できます。
●簡便
逆転写反応とPCRを2ステップながら同一サンプルチューブ中で行うことができ、操作が簡便です。
●迅速解析
KOD Dashは、PCRの伸長時間を1kb/30sec.で設定できるため、RT-PCRにかかる時間を短縮することができます。


 

実施例

RT-PCRの効率の検討

HeLa Total RNAを鋳型として、β-actin(838bp)をターゲットとするRT-PCRにおいて、鋳型量を変化させた場合の増幅効率を、当社従来品および他社のRT-PCRキットと比較した。
MagExtracterTM -RNA-を用いて抽出したHeLa Total RNA 100pg〜1.0μgをOligo(dT)プライマーで42℃、20min.逆転写反応を行った後、99℃で5min.加熱して不活性を行った。RT反応液全量20μlを、100μlの系に持ち込みPCRを行った。
ReverTra Dash®では、弊社従来品および他社RT-PCRキットに比べて少量の鋳型RNAからのRT-PCRが可能であることが確認された。

 
 

参考文献

1) S. Natsuka et al., J. Biochem.(Tokyo), 130: 731-735(2001)
 

製品内容

KOD Dash(2.5U/μl)  100μl
ReverTra Ace®  100μl
5×RT Buffer[TRT-1B]  400μl
10×PCR Buffer*[LDP-1B]  1ml
Random Primer [FSK-301]  100μl
Oligo(dT)20 Primer [FSK-201]  100μl
10mM dNTPs[NTP-301]  200μl
RNase Inhibitor 100μl
RNase Free H2O 1.2ml
G3PDH Control Primer Set**  50μl each(10pmol/μl each)
Positive Control Human G3PDH RNA  50μl

*10×PCR BufferはKOD Dash用Bufferと同一組成です。
**Human・Mouse・Rat・Swineに対応。G3PDHはシュードジーンが多いため、サンプルに用いる場合には、サンプルをDNaseⅠ処理することをお薦めします。
 

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(別売りパーツ)

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
ReverTra Ace用 Buffer (5×RT Buffer) TRT-1B 1ml ¥1,000 -20℃ 該当無し
KOD Dash用 Buffer LDP-1B 1ml ¥1,000 -20℃ 該当無し
dNTPs Mixture(10mM) NTP-301 0.2ml ¥8,000 -20℃ データシート 該当無し
Oligo(dT)20 Primer FSK-201 1nmole ¥8,000 -20℃ データシート 該当無し
Random Primer(9mer) FSK-301 2.5nmoles ¥8,000 -20℃ データシート 該当無し

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データシート
SDS 法規制※1
KOD Dash LDP-101 250U×1本 ¥25,000 -20℃ 取扱説明書 データシート 該当無し

●RNase Inhibitor

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
RNase Inhibitor, recombinant SIN-201 2,500U×1本 ¥10,000 -20℃ データシート 該当無し
※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。