改良型M-MLV逆転写酵素を使用した高効率cDNA合成キットです。

高効率cDNA合成キット ReverTra Ace -α-®

価格表

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
FSK-101 100回用 ¥53,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

用途

●RT-PCR用cDNA合成

説明

本キットで使用しているReverTra Ace®は、高温反応性と反応効率を向上させた改変型M-MLV RTase(RNaseH-)であり、従来のRTaseに比べ長いcDNAの合成が可能です(14kbまでのcDNA合成を確認しています)。

特長

●高効率

高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」を使用しており、高効率なcDNA合成を行うことができます。
 

●広い応用範囲

Random Primer、Oligo dT Primer、及びSpecific Primerを用いる逆転写反応が可能であり、様々な場合に応じて使用することができます。
 

●確実

ポジティブコントロールを含むため、各ステップを確認しつつ実験を進めることができます。

実施例

1. PCRに使用する酵素の比較

ReverTra Ace -α-®を用いてHeLa Total RNA(1μg)を鋳型として、cDNA合成を行った後、種々のPCR酵素を用いて、β-actin(838bp)をターゲットとするPCRを行いました。cDNA合成反応は、20μlの系を用いて、42℃で20min.行い、その後、99℃で5min.処理しました。その後、cDNA合成反応液に80μlのPCR溶液を加え全量を100μlとした後、PCRを行いました。
その結果、すべての場合において増幅が確認でき、ReverTra Ace -α-®の逆転写産物は、様々なPCR酵素を用いる増幅に適用できることが確認できました。

参考文献

1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)

製品内容

ReverTra Ace®                       100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕         400μl
Random Primer〔FSK-301〕     100μl
Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕         200μl
RNase Inhibitor                      100μl
RNase Free H2O                    1.2ml
G3PDH Control Primer Set**
                                       50μl each
Positive Control Human G3PDH RNA
                                               50μl

*5×RT BufferはReverTra Ace®用Bufferと同一組成です。
**Human・Mouse・Rat・Swineに対応。
G3PDHは偽遺伝子が多いため、サンプルに用いる場合には、サンプルをDNase処理することをお薦めします。

基本反応条件

〈cDNA合成〉
滅菌蒸留水                     Xμl
鋳型RNA
   total RNA       100-1000ng
   mRNA                10-100ng
Prime
   Oligo(dT)20 Primer    1μl
   Random Primer           1μl
   Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer                   4μl
10mM dNTPs                  2μl
ReverTra Ace®               1μl
RNase Inhibitor               1μl
Total Volume                 20μl

*このプライマーはPCR用の3'Primer(アンチセンス鎖と同じ配列になります)と同じです。

30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.

**この反応はRandom Primerの場合のみ必要です。

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ワンポイントアドバイス

● PCR反応液への持ち込み量
TaqベースのPCR酵素、及びKOD Dashの反応には最大20%、KOD -Plus- series、及びKOD FX seriesの反応には最大4%、好ましくは2%以下の逆転写反応液を用いることをお薦めします。

●鋳型RNA
鋳型RNAとして、total RNA、mRNA、tRNA、及びrRNAが使用できます。いずれの場合でも純度の高いサンプルを使用した方が、良好な結果を得ることができます。

●コントロール系
サンプルを初めてRT-PCRする場合には、コントロール実験も同時に行うことをお薦めします。本キットのコントロール用G3PDHプライマーは、human、mouse、rat、及びswineに対応しており、0.45kbのPCR産物を生じます。

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(別売りパーツ)

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※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。