DNA/RNA断片の脱リン酸化に最適です。容易に熱失活させることができ便利です。

ウシ由来脱リン酸化酵素 Calf Intesitine Alkaline Phosphatase

価格表

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
CAP-101 1,000U×1本 ¥10,000 -20℃ データシート SDS 該当無し
CAP-101X5 (1,000U×1本)×5 ¥40,000 -20℃ データシート SDS 該当無し

用途

●クローニングベクターのセルフライゲーション防止
●Kinaseによる[γ-32P]ATPを使ったDNA/RNAの5'端の標識の前処理
 

説明

本酵素は、分子量100,000、等電点(PI)=5.7、至適pH10.0~10.5であり、DNA及びRNAのリン酸モノエステル結合を加水分解する活性を有します。
ジリン酸エステル結合やトリリン酸結合には作用しませんが、ATP等のピロリン酸結合にも弱い加水分解作用を示します。阻害剤としてはCu2+、Ag+、Hg2+、及びEDTAなどが知られています。
本酵素は、ライゲーション反応にDNA断片の5‘末端のリン酸基が必要であることを利用し、制限酵素処理したベクターを脱リン酸化処理することによるセルフライゲーションの防止などに用いられます。
また、5‘末端標識プローブを作製するときに、あらかじめプローブの5’端のリン酸基を除去することによる、Kinaseと[γ-32P]ATPを用いる標識の効率の向上などにも用いられます。

特長

●高い耐熱性

本酵素は高い耐熱性を示し、平滑末端を有するDNA断片などの高温での長時
間の処理に適しています。
 

原理

実施例

BAPとCIAPの熱安定の違い

<b>BAPとCIAPの熱安定の違い</b>

BAPとCIAPの熱安定性を比較しました。
BAPはCIAPに比べて非常に熱安定性が高いことが分かりました。よって、BAP処理DNAサンプルをLigation反応に使用する場合には必ずフェノール処理などの精製が必要であることが示唆されました。
一方、CIAPは65℃、30分間の熱処理でほとんど失活させることができました。

参考文献

1)H. N. Ferunley, The Enzymes (3rd Ed.), 4: 417-447(1971)
2)R. K. Morton, Biochem. J., 61: 232-240(1955)
3)F. Dray et al., Methods of Enzymatic Analysis, 9: 348-362(1986)
4)P. Rathman and B. B. Saxtena, Methods of Enzymatic Analysis,9: 396-404(1986)

製品内容

Calf Intesitine Alkaline Phosphatase(1-3U/μl)
10×Buffer〔CAP-1B〕
 

形状:
30mM Triethanolamin(pH7.6)
1mM MgCl2
50% Glycerol
10×Buffer 〔Code No. CAP-1B〕組成:
  500mM Tris-HCl (pH8.0)

活性の定義:
37℃、pH10.2において、1分に1μmoleのp-Nitorophenyl phosphateを加水分解する酵素量を1Uとします。

起源:
Calf intestine

純度:
本酵素5Uと1μgのλDNA/HindⅢ分解物とを、37℃で16時間反応させてもDNAの電気泳動パターンに変化はない。
本酵素2Uと2μgのtRNAとを、37℃で16時間反応させてもtRNAの電気泳動パターンは変化しません。
 

基本反応条件

<5'突出末端>
滅菌蒸留水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 10U
Total Volume 200μl

37℃, 30min.

<平滑末端、3'突出末端>
滅菌蒸留水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 30U
Total Volume 200μl

37℃, 15min.
50℃, 15min.
 

ワンポイントアドバイス

反応後のサンプルの精製
本酵素は65℃、30min.の加熱処理によってほとんど失活しますが、完全を期す場合には、フェノール処理を行うか、キットによる精製をお薦めします。
キットとしては、MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- などをお勧めします。
 

関連商品

(別売りパーツ)

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
Calf Intestine Alkaline Phosphatase用 Buffer CAP-1B 1ml×1本 ¥1,000 -20℃ 該当無し

●脱リン酸化反応後のサンプルの精製

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
MagExtractor -PCR & Gel Clean up- NPK-601 200回用 ¥28,000 室温 取扱説明書 SDS 該当無し
※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。