Tripluc^® Luciferase Assay Reagent

レポーターアッセイは、ある遺伝子の転写制御配列(プロモーターなど)をレポーター遺伝子と連結し、細胞内で発現したレポーター酵素の活性を指標に遺伝子発現を評価する手法です。
MultiReporter Assay System –Tripluc^®–は、(独)産業技術総合
研究所・近江谷先生らのグループで開発された緑(SLG)、橙色(SLO)、及び赤色(SLR)発光の3色のルシフェラーゼを用いたマルチレポーターアッセイシステムです。これらのルシフェラーゼはいずれもD-ルシフェリンを発光基質として利用するため、色分離測定によって最大3つのレポーター酵素の活性を簡便かつ同時にアッセイすることが可能です。1つのレポーターを内部標準に用いても、2つの被験配列の転写調節を測定することができます。
Tripluc^® Luciferase Assay Reagentは、MultiReporter Assay System –Tripluc^®–のアッセイに最適化された測定試薬です。

●3色でアッセイ可能

緑色(SLG)、橙色(SLO)、及び赤色(SLR)発光の3色のルシフェラーゼを用いた3色での評価(2種類の被検配列+インターナルコントロール等)が可能です。
複数の遺伝子発現を同時に評価することができ、より厳密な実験が可能です。
 

● 1ステップアッセイ

従来の2液タイプの検出試薬では、細胞溶解と発光反応を別々に行うため、煩雑な操作が必要でした。本試薬では、培養液に試薬を添加し、10分間インキュベートするだけでアッセイが可能です。
 

●安定した発光

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試薬組成を最適化し、安定した発光が可能になりました。シングルチューブでのアッセイに加え、マルチウェルプレートでのアッセイに最適です。

1.3色分離モデル実験

「MultiReporter Assay System -Tripluc-」の それぞれ緑・橙・赤色に発光さ
せるルシフェラーゼを発現するベクター3種(SLG、SLO、SLR)を混合し、HeLa S3細胞へトランスフェクションし、3色のルシフェラーゼの発光を分離計測しました。この際、SLGは内部標準として一定量加え、SLO、SLRの混合比を変えています。計測値をSLG値で標準化し、プロットしました。



これより、それぞれの色が定量的に計測されていることが分かります。

実施例2 : 転写因子AP1、NFκB活性化の同時解析

1) Y. Nakajima et al., Biotechniques, 38: 891-894(2005)
2) 中島芳浩ら、バイオテクノロジージャーナル, 7-8, 453-455(2005)
3) 「動物実験代替のためのバイオマテリアル・デバイス」(シーエムシー出版)、235-243
4) R. V Vadim et al.,Biochemistry, 38: 8271-8279(1999)
5) Y. Ohmiya et al., Sci. Rept.Yokosuka City Mus. 47: 31-3(2000)
6) V. Vadim et al., Biochem.Biophys. Res. Commun. 280:1286-1291(2001)
7) V. R. Viviani et al., Photochem.Photobiol., 76: 538-544(2002)
8) Y. Nakajima, Biosci. Biotechnol. Biochem. 68: 948-951(2004)
9) Y. Nakajima et al., FEBS Letters 565: 122-126(2004)
10)近江谷克裕、生化学, 76: 5-15(2004)

<製品使用文献>
S. Hirano et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. : 249, 8–15 (2010)
  https://doi.org/10.1016/j.taap.2010.08.019
Y. Kimura et al., Toxicol. Vitr. : 28, 759–768 (2014)
S. Wakuri et al. Anal. Biochem. : 522, 18-29 (2017)
  https://doi.org/10.1016/j.ab.2017.01.015
K. Morikawa et al. Biochem. Biophys. Rep. : 18, 1006-45 (2019)
S. Fukuda et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 508, 928-933 (2019)
  https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2018.12.027